【膽固醇檢測(cè)】

目前，有關(guān)食品中膽固醇的測(cè)定方法主要有氣相色譜法，高效液相色譜法，比色法。這些方法都可以完成膽固醇的檢測(cè)，但樣品基質(zhì)復(fù)雜，目標(biāo)物含量低導(dǎo)致分析結(jié)果不理想，而采用凝膠滲透色譜法（GPC）對(duì)樣品進(jìn)行前處理，可以有效解決上述問題。

凝膠滲透色譜法采用惰性多孔材料為固定相，利用空間排阻效應(yīng)將分子大小不同的物質(zhì)分離，達(dá)到制備純化的目的。本文采用全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)，提取目標(biāo)物膽固醇，用高效液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定，從而建立一個(gè)簡單，快捷，準(zhǔn)確的食用油中膽固醇的測(cè)定方法。

【試劑】

1.膽固醇標(biāo)品（99%）

2.甲醇（HPLC）

3.乙酸乙酯（分析純）

4.環(huán)己烷（分析純）

5.石油醚（分析純）

6.水（超純水）

【儀器設(shè)備】

1.SGPCS-凝膠凈化系統(tǒng)

2.凝膠滲透色譜柱

3.LC10高效液相色譜儀（等度）

4.旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀

【含量測(cè)定】

標(biāo)準(zhǔn)溶液制備

準(zhǔn)確稱取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品0.05g，用無水乙醇溶解并定容至 50ml作為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液放置0~4℃冰箱中備用。

膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液：分別吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(1.0mg/ml)25ul、50ul、100ul、500ul、2000ul，用無水乙醇定容至10ml，現(xiàn)配現(xiàn)用。

試樣的制備

分別稱取0.5g植物油和0.5g鮮奶，用等體積混合的環(huán)己烷和乙酸乙酯混合溶劑定容至5ml，供后續(xù)分離凈化使用。抽取試樣注入凝膠凈化系統(tǒng)，流動(dòng)相：等體積混合的環(huán)己烷和乙酸乙酯溶液，流速：5ml/min,收集7.5-16.5min餾分于試劑瓶中，然后移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至干，加入5ml乙醇溶解，供HPLC檢測(cè)用。

【色譜條件】

色譜柱:C18  250mm*4.6mm  粒度5um

流動(dòng)相：乙醇

流速：1.0ml/min

紫外檢測(cè)器波長：208nm

【譜圖】